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PCR實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)原則

  • Jason Peng

  • Product Manager for PCR實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)原則,Engaged in related product development for 15 years,with a wealth of related technical experience

  • 2022-06-19  |  Visits:


PCR實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)原則.得創(chuàng)實(shí)驗(yàn)室工程專業(yè)從事pcr實(shí)驗(yàn)室工程規(guī)劃,設(shè)計(jì),施工一條路凈化工程公司,歡迎來(lái)電咨詢:027-82289886
我們之前碰到過(guò)一些客戶,說(shuō)做PCR實(shí)驗(yàn)總是出現(xiàn)假陽(yáng)性,明明沒(méi)有加模板最后卻擴(kuò)出了產(chǎn)物。如果這種現(xiàn)象頻頻出現(xiàn),就要注意一下操作環(huán)境了。如果你去百度上搜索“PCR出現(xiàn)假陽(yáng)性了怎么辦”,下面給出的建議一定會(huì)有防止交叉污染這條建議。有人說(shuō)模板DNA是大分子,溶于去離子水中,怎么會(huì)無(wú)緣無(wú)故跑出來(lái)污染環(huán)境呢?小編將會(huì)一一解釋。

一.PCR實(shí)驗(yàn)室選擇位置和總平面布置

位置的選擇應(yīng)根據(jù)以下要求和技術(shù)經(jīng)濟(jì)方案的比較確定:
1、應(yīng)在大氣含塵濃度較低、自然環(huán)境較好的地區(qū);
2、應(yīng)遠(yuǎn)離鐵路、碼頭、機(jī)場(chǎng)、交通動(dòng)脈、工廠、倉(cāng)庫(kù)、堆場(chǎng)等嚴(yán)重空氣污染、振動(dòng)或噪聲干擾區(qū)域,如不遠(yuǎn)離嚴(yán)重空氣污染源,應(yīng)位于最大風(fēng)向風(fēng)側(cè),或全年最小風(fēng)向風(fēng)側(cè);
3、應(yīng)布置在廠區(qū)內(nèi)環(huán)境清潔、人流不穿越或少穿越的地區(qū)。
對(duì)于具有微振動(dòng)控制要求的潔凈廠房的位置選擇,應(yīng)實(shí)際測(cè)量周圍現(xiàn)有振源的振動(dòng)影響,并分析比較精密設(shè)備和精密儀器的允許環(huán)境振動(dòng)值。
實(shí)驗(yàn)室與煙囪之間的水平距離不應(yīng)小于煙囪高度的12倍。
實(shí)驗(yàn)室與交通干道之間的距離不宜小于50米。
實(shí)驗(yàn)室周圍應(yīng)設(shè)置環(huán)形消防車道(可使用交通道路)。如有困難,可沿廠房?jī)蓷l長(zhǎng)邊設(shè)置消防車道。
實(shí)驗(yàn)室周圍的路面,應(yīng)選用整體性好、灰塵少的材料。
實(shí)驗(yàn)室周圍應(yīng)進(jìn)行綠化??梢苑N植草坪,種植對(duì)大氣中粉塵濃度沒(méi)有有害影響的樹(shù)木,形成綠化社區(qū),但不能阻礙消防作業(yè)。

PCR實(shí)驗(yàn)室效果圖 PCR實(shí)驗(yàn)室效果圖
   

二.PCR實(shí)驗(yàn)室分區(qū)及區(qū)域功能

PCR實(shí)驗(yàn)室分區(qū)及區(qū)域功能
PCR實(shí)驗(yàn)室分為四個(gè)區(qū)域,進(jìn)?各?作區(qū)域必須嚴(yán)格按照單??向進(jìn)?,不同的?作區(qū)域使?不同的?作服(例如不同的顏
?)。?作?員離開(kāi)各?作區(qū)域時(shí),不得將?作服帶出,四區(qū)域分別為:1.試劑配制區(qū)2.樣品處理區(qū)3.核酸擴(kuò)增區(qū)4.產(chǎn)物分析區(qū)如使?全?動(dòng)分析儀,區(qū)域可適當(dāng)合并,三四區(qū)可合并為擴(kuò)增產(chǎn)物分析。
各區(qū)的功能:完備的實(shí)驗(yàn)室配套設(shè)施是保證實(shí)驗(yàn)?作的必要條件,應(yīng)根據(jù)各個(gè)實(shí)驗(yàn)室實(shí)驗(yàn)內(nèi)容的不同配備相應(yīng)的設(shè)備和儀器,如超凈?作臺(tái)、離?機(jī)、加樣器等。
PCR實(shí)驗(yàn)室并沒(méi)有嚴(yán)格的凈化要求,但是為避免各個(gè)實(shí)驗(yàn)區(qū)域間交叉污染的可能性,宜采?全送全排的?流組織形式。同時(shí),要嚴(yán)格控制送、排風(fēng)的?例以保證各實(shí)驗(yàn)區(qū)的壓?要求。
1、試劑貯存和準(zhǔn)備區(qū) 該實(shí)驗(yàn)區(qū)主要進(jìn)?的操作為貯存試劑的制備、試劑的分裝和主反應(yīng)混合液的制備。試劑和?于標(biāo)本制作的材料應(yīng)直接運(yùn)送?該區(qū),不得經(jīng)過(guò)其他區(qū)域。試劑原材料必須貯存在本區(qū)內(nèi),并在本區(qū)內(nèi)制備成所需的貯存試劑。 對(duì)與?流壓?的控制,本區(qū)并沒(méi)有嚴(yán)格的要求。
2、標(biāo)本制備區(qū) 該區(qū)域主要進(jìn)?的操作為臨床標(biāo)本的保存、核酸(RNA、DNA)提取、貯存及其加??擴(kuò)增反應(yīng)管和測(cè)定RNA時(shí) DNA的合成。本區(qū)的壓?梯度要求為:相對(duì)于鄰近區(qū)域?yàn)檎龎?,以避免從鄰近區(qū)進(jìn)?本區(qū)的?溶膠污染。另外,由于在加樣操作中可能會(huì)發(fā)??溶膠所致的污染,所以應(yīng)避免在本區(qū)內(nèi)不必要的?動(dòng)。
擴(kuò)增反應(yīng)混合物配制和擴(kuò)增區(qū) 該區(qū)域主要進(jìn)?的操作為DNA或DNA擴(kuò)增。ft外,已制備的DNA模板和合成的DNA(來(lái)?樣本制備區(qū))的加?和主反應(yīng)混合液(來(lái)?試劑貯存和制備區(qū))制備成反應(yīng)混合液等也可在本區(qū)內(nèi)進(jìn)?。在巢式PCR測(cè)定中,通 常在第?輪擴(kuò)增后必須打開(kāi)反應(yīng)管,因ft巢式擴(kuò)增有較?的污染危險(xiǎn)性,第?次加樣必須在本區(qū)內(nèi)進(jìn)?。 本區(qū)的壓?梯度要 求為:相對(duì)于鄰近區(qū)域?yàn)樨?fù)壓,以避免?溶膠從本區(qū)漏出。為避免?溶膠所致的污染,應(yīng)盡量減少在本區(qū)內(nèi)的不必要的?動(dòng)。個(gè)別操作如加樣等應(yīng)在超凈臺(tái)內(nèi)進(jìn)?。
4、擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)該區(qū)域主要進(jìn)?的操作為擴(kuò)增?段的測(cè)定。如使?全?動(dòng)封閉分析儀器檢測(cè),ft區(qū)域可不設(shè)。本區(qū)是最主要的擴(kuò)增產(chǎn)物污染來(lái)源,因ft對(duì)本區(qū)的壓?梯度的要求為:相對(duì)于鄰近區(qū)域?yàn)樨?fù)壓,以避免擴(kuò)增產(chǎn)物從本區(qū)擴(kuò)散?其它區(qū)域。
以上就是誠(chéng)志對(duì)有關(guān)“PCR實(shí)驗(yàn)室有哪些分區(qū)?PCR實(shí)驗(yàn)室分區(qū)的功能是什么?”相關(guān)問(wèn)題的說(shuō)明,希望能夠幫助到你,更多實(shí)驗(yàn)室知識(shí)敬請(qǐng)關(guān)注我們。

PCR實(shí)驗(yàn)室效果圖 PCR實(shí)驗(yàn)室效果圖
   

三.PCR實(shí)驗(yàn)室空調(diào)通風(fēng)系統(tǒng)設(shè)計(jì)及壓力控制

PCR實(shí)驗(yàn)室空調(diào)通風(fēng)系統(tǒng)設(shè)計(jì)及壓力控制
PCR實(shí)驗(yàn)室沒(méi)有嚴(yán)格的凈化要求,但為了避免各實(shí)驗(yàn)區(qū)之間交叉污染的可能性,應(yīng)采用全送全排的氣流組織形式。同時(shí),應(yīng)嚴(yán)格控制輸送和排氣的比例,以確保每個(gè)試驗(yàn)區(qū)的壓力要求。
3.1.試劑儲(chǔ)存和準(zhǔn)備區(qū)域
實(shí)驗(yàn)區(qū)的主要操作是儲(chǔ)存試劑的制備、試劑的包裝和主要反應(yīng)混合物的制備。用于標(biāo)本生產(chǎn)的試劑和材料應(yīng)直接運(yùn)輸?shù)皆搮^(qū)域,不得通過(guò)其他區(qū)域。試劑原料必須儲(chǔ)存在該區(qū)域,并制備所需的儲(chǔ)存試劑。
對(duì)個(gè)區(qū)域?qū)饬鲏毫Φ目刂茮](méi)有嚴(yán)格的要求。
3.2標(biāo)本制備區(qū)
該地區(qū)的主要操作是保存臨床標(biāo)本和核酸(RNA、DNA)提取、存儲(chǔ)和添加到擴(kuò)增反應(yīng)管和測(cè)定RNA時(shí)DNA的合成。
該區(qū)域的壓力梯度要求為:相對(duì)于相鄰區(qū)域的正壓,以避免從相鄰區(qū)域進(jìn)入該區(qū)域的氣溶膠污染。此外,由于在樣品添加過(guò)程中可能會(huì)發(fā)生氣溶膠污染,因此應(yīng)避免在該區(qū)域不必要的行走。
3.3.擴(kuò)增反應(yīng)混合物的制備和擴(kuò)增區(qū)域
該區(qū)域的主要操作是DNA或DNA擴(kuò)大。此外,已制備的DNA合成模板DNA(來(lái)自樣品制備區(qū))添加和主反應(yīng)混合物(來(lái)自試劑儲(chǔ)存和制備區(qū))制備反應(yīng)混合物也可在本區(qū)進(jìn)行。PCR在測(cè)量中,反應(yīng)管通常必須在第一輪擴(kuò)增后打開(kāi),因此巢式擴(kuò)增具有較高的污染風(fēng)險(xiǎn),第二次加樣必須在該區(qū)域進(jìn)行。
該區(qū)域的壓力梯度要求為:相對(duì)于相鄰區(qū)域的負(fù)壓,以避免氣溶膠從該區(qū)域泄漏。為了避免氣溶膠造成的污染,應(yīng)盡量減少在該地區(qū)不必要的行走。應(yīng)在超平臺(tái)上進(jìn)行個(gè)別操作,如添加樣品。
3.4擴(kuò)大產(chǎn)品分析區(qū)域
該區(qū)域的主要操作是測(cè)量擴(kuò)增片段。如果使用全自動(dòng)封閉分析儀進(jìn)行檢測(cè),則不能設(shè)置該區(qū)域。
該區(qū)域是擴(kuò)增產(chǎn)物污染的主要來(lái)源,因此該區(qū)域的壓力梯度要求為:相對(duì)于相鄰區(qū)域的負(fù)壓,以避免擴(kuò)增產(chǎn)物從該區(qū)域擴(kuò)散到其他區(qū)域。
4預(yù)防和控制污染
PCR實(shí)驗(yàn)室規(guī)劃設(shè)計(jì)的核心問(wèn)題是如何避免污染。在實(shí)踐中,有幾種常見(jiàn)的污染類型:擴(kuò)大產(chǎn)物污染;自然基因組DNA污染;試劑和標(biāo)本之間的污染。一旦發(fā)生污染,必須停止實(shí)驗(yàn),直到找到污染源,實(shí)驗(yàn)結(jié)果必須無(wú)效,需要重新進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。因此,在污染發(fā)生后,在實(shí)驗(yàn)室周圍尋找污染源不僅需要時(shí)間和繁瑣,而且浪費(fèi)人力和物力資源。因此,為了避免污染,首先應(yīng)該是預(yù)防,而不是排除。

PCR實(shí)驗(yàn)室效果圖 PCR實(shí)驗(yàn)室效果圖
   

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