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醫(yī)學檢測PCR實驗室設(shè)計

  • Jason Peng

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  • 2022-07-11  |  Visits:


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PCR實驗室也稱之為基因擴增實驗室,運用分子生物學技術(shù),根據(jù)放大DNA片段,也可視作是生物體外的獨特DNA拷貝。運用基因追蹤系統(tǒng)軟件,把握人體內(nèi)部100的病毒性含量,這類實驗的精確度可做到納米級別。

一.PCR實驗室壓差設(shè)計

PCR實驗室壓差設(shè)計
PCR實驗室應設(shè)計為負壓潔凈室,通過壓差控制使整個潔凈室成為負壓潔凈室PCR試實驗過程中,試劑和標本不受氣溶膠污染,并減少擴增產(chǎn)物對人員和環(huán)境的污染。
每個實驗室和不潔凈區(qū)之間的大門保持正壓,>10Pa,實驗與閘門之間的氣流組織方向如下:試劑準備區(qū)的氣流流向閘門,標本制備區(qū)的氣流流向閘門,而標本制備區(qū)的氣流流向閘門PCR擴建區(qū)的氣流方向由閘門流向PCR同樣的純化區(qū)也是如此;
同時,根據(jù)試劑的單向流動方向,每個實驗室設(shè)計不同的壓力梯度,通過試劑準備區(qū)( 20Pa)、(Pa)、擴增反應一區(qū)(-5)Pa)、純化區(qū)(-10Pa)、擴大反應二區(qū)(-20)Pa)、后純化區(qū)(-25)Pa)逐漸降低壓力,形成單向負壓梯度。

PCR實驗室效果圖 PCR實驗室效果圖
   

二.PCR實驗室功能區(qū)布局設(shè)計

臨床基因擴增檢驗實驗室原則上分為四個分隔開的工作區(qū)域:
1、試劑貯存和準備區(qū)
2、標本制備區(qū)
3、擴增反應混合物配制和擴增區(qū)
4、擴增產(chǎn)物分析區(qū)
如使用全自動分析儀,區(qū)域可適當合并。

PCR實驗室效果圖 PCR實驗室效果圖
   

三.PCR實驗室分區(qū)及區(qū)域功能

PCR實驗室分區(qū)及區(qū)域功能
PCR實驗室分為四個區(qū)域,進?各?作區(qū)域必須嚴格按照單??向進?,不同的?作區(qū)域使?不同的?作服(例如不同的顏
?)。?作?員離開各?作區(qū)域時,不得將?作服帶出,四區(qū)域分別為:1.試劑配制區(qū)2.樣品處理區(qū)3.核酸擴增區(qū)4.產(chǎn)物分析區(qū)如使?全?動分析儀,區(qū)域可適當合并,三四區(qū)可合并為擴增產(chǎn)物分析。
各區(qū)的功能:完備的實驗室配套設(shè)施是保證實驗?作的必要條件,應根據(jù)各個實驗室實驗內(nèi)容的不同配備相應的設(shè)備和儀器,如超凈?作臺、離?機、加樣器等。
PCR實驗室并沒有嚴格的凈化要求,但是為避免各個實驗區(qū)域間交叉污染的可能性,宜采?全送全排的?流組織形式。同時,要嚴格控制送、排風的?例以保證各實驗區(qū)的壓?要求。
1、試劑貯存和準備區(qū) 該實驗區(qū)主要進?的操作為貯存試劑的制備、試劑的分裝和主反應混合液的制備。試劑和?于標本制作的材料應直接運送?該區(qū),不得經(jīng)過其他區(qū)域。試劑原材料必須貯存在本區(qū)內(nèi),并在本區(qū)內(nèi)制備成所需的貯存試劑。 對與?流壓?的控制,本區(qū)并沒有嚴格的要求。
2、標本制備區(qū) 該區(qū)域主要進?的操作為臨床標本的保存、核酸(RNA、DNA)提取、貯存及其加??擴增反應管和測定RNA時 DNA的合成。本區(qū)的壓?梯度要求為:相對于鄰近區(qū)域為正壓,以避免從鄰近區(qū)進?本區(qū)的?溶膠污染。另外,由于在加樣操作中可能會發(fā)??溶膠所致的污染,所以應避免在本區(qū)內(nèi)不必要的?動。
擴增反應混合物配制和擴增區(qū) 該區(qū)域主要進?的操作為DNA或DNA擴增。ft外,已制備的DNA模板和合成的DNA(來?樣本制備區(qū))的加?和主反應混合液(來?試劑貯存和制備區(qū))制備成反應混合液等也可在本區(qū)內(nèi)進?。在巢式PCR測定中,通 常在第?輪擴增后必須打開反應管,因ft巢式擴增有較?的污染危險性,第?次加樣必須在本區(qū)內(nèi)進?。 本區(qū)的壓?梯度要 求為:相對于鄰近區(qū)域為負壓,以避免?溶膠從本區(qū)漏出。為避免?溶膠所致的污染,應盡量減少在本區(qū)內(nèi)的不必要的?動。個別操作如加樣等應在超凈臺內(nèi)進?。
4、擴增產(chǎn)物分析區(qū)該區(qū)域主要進?的操作為擴增?段的測定。如使?全?動封閉分析儀器檢測,ft區(qū)域可不設(shè)。本區(qū)是最主要的擴增產(chǎn)物污染來源,因ft對本區(qū)的壓?梯度的要求為:相對于鄰近區(qū)域為負壓,以避免擴增產(chǎn)物從本區(qū)擴散?其它區(qū)域。
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PCR實驗室效果圖 PCR實驗室效果圖
   

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