微生物實驗室的常用儀器設(shè)備及使用的注意事項

4月26日，國家衛(wèi)生委員會召開全國視頻會議，明確提出所有縣區(qū)級以上疾病對策機構(gòu)、二級以上綜合醫(yī)院應(yīng)緊急改造，在短時間內(nèi)形成核酸檢測能力。

各地公立機構(gòu)的檢驗?zāi)芰Σ荒軡M足需求只是暫時的，獨立醫(yī)學(xué)實驗室在充實檢驗?zāi)芰Φ耐瑫r，發(fā)揮自己豐富的檢驗管理運營理念，以及地區(qū)化壟斷的經(jīng)驗優(yōu)勢，融入國家隊核酸檢驗?zāi)芰Φ慕ㄔO(shè)

隨著各地建立pcr實驗室，本文從硬件基礎(chǔ)的角度整理了PCR實驗室建設(shè)的幾個要點，獨立醫(yī)學(xué)實驗室運用豐富的運營經(jīng)驗，建設(shè)指導(dǎo)

本平臺對接多家獨立醫(yī)學(xué)實驗室，提供不同ICL機構(gòu)PCR實驗室建設(shè)的相關(guān)優(yōu)勢，可以進行PCR實驗室建設(shè)的需求咨詢，歡迎后臺小編(微信號:yourivd))
 

如何建設(shè)PCR實驗室

以下是PCR實驗室建設(shè)過程中的幾個重要控制點，根據(jù)實驗室的具體情況制作質(zhì)量系統(tǒng)，制作《質(zhì)量手冊》、《程序文件》、《作業(yè)指導(dǎo)書》，保證管理系統(tǒng)的運行效果。

管理系統(tǒng)的特點是明確的目的、規(guī)范的管理、有效的制約、高效的機制、能夠自我發(fā)展的整體。

建立完善的SOP文件，規(guī)定完成各種質(zhì)量活動的方法，各SOP應(yīng)對一組相互關(guān)系的活動進行說明。

每個SOP文件都應(yīng)該說明這個質(zhì)量各個環(huán)節(jié)的輸入、轉(zhuǎn)換和輸出所需要的文件、物資、人員、記錄以及與相關(guān)活動的界面關(guān)系。

明確各環(huán)節(jié)轉(zhuǎn)換過程中各要素的要求，即誰做、什么、什么程序、達到什么要求、如何控制、形成什么記錄和報告以及相應(yīng)的審查手續(xù)。

規(guī)定在質(zhì)量活動中需要注意的例外或特殊情況的糾正措施。SOP應(yīng)簡潔明了，易于理解，員工應(yīng)熟練掌握和嚴格遵守。

02PCR實驗室關(guān)設(shè)置

完成一組PCR實驗，通常需要經(jīng)過試劑配制、樣品處理、核酸擴張和產(chǎn)品分析四個實驗過程。

這四個實驗過程的實驗室應(yīng)相鄰配置，構(gòu)成獨立的PCR實驗區(qū)。標準的PCR實驗區(qū)包括試劑準備區(qū)、標本準備區(qū)、擴展區(qū)、產(chǎn)物分析區(qū)、各區(qū)輔助緩沖區(qū)和公共走廊。

pCR實驗室整體平面布局

某醫(yī)院PCR實驗室平面布局如圖1所示，整個區(qū)域都有公共走廊，每個獨立實驗區(qū)都有專門的緩沖區(qū)。通過壓差控制，在PCR實驗中試劑和標本不受氣溶膠污染，減少擴大產(chǎn)品對人員和環(huán)境的污染。

圖表1、某醫(yī)院PCR實驗室平面圖

試劑準備區(qū)

這個實驗區(qū)主要進行的操作是儲存試劑的制備、試劑的分裝和主反應(yīng)合液的制備。

試劑和用于標本制作的材料應(yīng)直接運輸?shù)皆搮^(qū)域，不得通過其他區(qū)域。試劑原材料必須儲存在本區(qū)，并在本區(qū)制備必要的儲存試劑。

試劑準備區(qū)配備2~8°C冰箱和-80°C冰箱，計算冷負荷時，需要計算。

房間面積應(yīng)控制在15m2~20m2。本區(qū)壓力梯度要求為：相對正壓狀態(tài)，防止外界含核酸氣溶膠的空氣進入，造成污染。

標本制備區(qū)

這個區(qū)域主要進行的操作是臨床標本的保存、核酸(RNA、DNA)的提取、保存、增加反應(yīng)管和測定RNA時的cDNA的合成。

標本制備區(qū)配備2~8°C冰箱和-20°C冰箱，計算冷負荷時需要計算。在標本制備區(qū)域，還需要配備生物安全柜來提取核酸。

微生物實驗室區(qū)分及要求

為了避免提取的核酸在柜內(nèi)反復(fù)循環(huán)，造成標本之間的交叉污染，出現(xiàn)假陽性的結(jié)果，該區(qū)域配備的生物安全柜必須為B2型。生物安全柜工作區(qū)域的垂直氣流均來自實驗室，排氣經(jīng)高效過濾器過濾后直接排到室外，不得返回安全柜和實驗室。

根據(jù)經(jīng)驗，在實驗室內(nèi)設(shè)置生物安全柜時，每臺設(shè)置一臺，實驗室面積增加10m2的標本制備區(qū)域的面積應(yīng)在25m2~30m2之間。本區(qū)壓力梯度要求為：相對于鄰近區(qū)為正壓，避免從鄰近區(qū)進入本區(qū)的氣溶膠污染。

擴展室

這個區(qū)域主要進行的操作是DNA或cDNA擴展。另外，制備的DNA模板和合成的cDNA(來自樣品制備區(qū))的加入和主反應(yīng)混合液(來自試劑的貯藏和制備區(qū))制備的反應(yīng)混合液等也可以在本區(qū)內(nèi)進行。

在巢式PCR測量中，通常在第一次擴張后必須打開反應(yīng)管，因此巢式擴張具有較高的污染危險性，第二次加樣必須在本區(qū)內(nèi)進行。

展室主要配備PCR實驗室的核心儀器PCR儀，本文實例使用ABI7500和ABI9700兩種PCR儀。

在實驗室建設(shè)過程中，需要為PCR儀配備專用的UPS電源，保證其正常工作。該區(qū)域的面積控制在15m2~20m2。

本區(qū)的壓力梯度要求為:相對于相鄰區(qū)域為負壓，以免氣溶膠從本區(qū)泄漏。為了避免氣溶膠造成的污染，應(yīng)盡量減少本區(qū)內(nèi)不必要的行走。個別操作，如樣品，應(yīng)在超凈臺內(nèi)進行。建議采用5~10Pa壓差，在控制方面比較容易實現(xiàn)。

產(chǎn)物分析區(qū)域

該區(qū)域主要進行的操作是擴展片段的測定。如果使用全自動封閉分析儀器進行檢測，則該區(qū)域不設(shè)置。

在室內(nèi)設(shè)置通風柜，保證室內(nèi)相對負壓，空氣從室外流向室內(nèi)。該區(qū)域面積控制在15m-20m。

本區(qū)域是最主要的擴展產(chǎn)品污染源，因此本區(qū)域的壓力梯度要求為:相對于鄰區(qū)域為負壓，避免擴展產(chǎn)品從本區(qū)域擴展到其他區(qū)域。建議采用5~10Pa壓差，在控制方面比較容易實現(xiàn)。

正負壓區(qū)緩沖室安裝

根據(jù)壓力梯度的要求，試劑配制室和樣品處理室相對正壓，擴展室和產(chǎn)物分析室相對負壓，要求正壓區(qū)和負壓區(qū)緩沖室的壓力設(shè)計大不相同。

正壓緩沖室符合一般正壓潔凈室的緩沖原則，主要是防止室外環(huán)境空氣中的氣溶膠進入室內(nèi)。正壓緩沖室的布置如圖2所示。

正壓緩沖室布局圖

負壓緩沖室要求緩沖室對核酸擴展室和產(chǎn)物分析區(qū)保持正壓，緩沖室外也保持正壓(主要滿足室內(nèi)凈化需求，如果室內(nèi)沒有清潔要求，可以作為0壓)。負壓緩沖室的布置如圖3所示。